Guida per l'utente per la semina delle cellule in un pallone di coltura cellulare a 5 strati
1.Pareare la sospensione cellulare della concentrazione richiesta, quindi medio con un contenitore in un contenitore. Un volume di 30-50 ml per layerisrecommeded.
2.Slowlyad la soluzione mista, il pallone di coltura cellulare a 5 strati con una pipetta sierologica. Per evitare le ormeggi di schiuma, si consiglia di impostare saldamente la pipetta contro il muro, consentire a Thestream di fluire lungo il pendio e risparmiare un po 'di liquido nella pipetta ogni volta.
Note: Whilea 10mlpipette Candispersethe media il fondo, la pipetta A25ML raggiungerà solo il segno del nido per disperdere il mezzo.
3.Posizione Il pallone multistrato in posizione verticale con il nido che ti segna, inclinarlo in senso orario di 45 ° e lasciare riposare in questa posizione per un po 'di livello theliquid in ogni strato.
4. Mettilo in piattavi sul banco da lavoro con il nido di markfacing verso l'alto.
5. Amossa delicatamente Itfromsidetoside per distribuire uniformemente le cellule sulle superfici di coltura.
Note: fare attenzione a Toshake, tosare delicatamente bolle di foamor e versare liquido da ogni strato.
6. Trasferisci il pallone per incubazione per incubazione
Culture MediumRemoval
1.Spirazione
Inclina il pallone45 ° in senso orario con il segno del nido di fronte a te. Counter-Clock saggio con un angolo di 45 ° mentre inverte il multi-flask verso di te. Quindi ritieni la pipetta sierologica nella piena aspirazione del fondo.
2.Poring
Inclina il pallone45 ° in senso antiorario con il nido che ti segna, versare il foglio esaurito dal pallone.
Suggerimenti: pipette sierologiche da 10 ml di anne suggeriti per la piena aspirazione.
Cellharvesting
1.Rinse OFF del siero residuo con tampone, aggiungi la soluzione di digestione (≥5 ml per strato) e mescola uniformemente. Quindi, seguire i passaggi 3-4 per distribuire al reagente dissociatore a ciascun strato.
2.Le per 2 minuti, quindi neutralizza e mescola con una soluzione inattivante seguendo i passaggi 3-4. Twiring delicatamente per rimuovere completamente le cellule.
3. Trasferire la soluzione in una tuba di centrifuga o altri contenitori per aspirazione o versamento.
4. Risposta il pallone con tampone per tre volte, quindi trasferire il tampone nella provetta di centrifuga per il passaggio e il conteggio.
Suggerimenti: cerca video "Nest Multiyer Flask" su YouTube (@Nestwuxi4075).
